Hlavní // Leukémie

Krevní test DAC, co to je

Syfilis je infekční pohlavní onemocnění způsobené spirochetami bledého treponému. Cesty přenosu: během sexu, z matky na plod, transfúze a mnohem méně často - rány na kůži, které přicházejí do styku s infekčními lézemi. V závislosti na stadiu je izolován primární, sekundární, latentní a terciární syfilis.

Přímé cesty

Mikroskopie tmavého pole

Bledý treponém nemůže růst na kultivačních médiích a nelze ho vizualizovat pod světelným mikroskopem. Protože detekce patogenu konvenční mikroskopií není možná, používá se speciální mikroskop s tmavým polem, kde je patogen viditelný jako spirála na tmavém pozadí.

Pro mikroskopii je biomateriál odebírán z léze podezřelé z nemoci. Mikroskopie v tmavém poli je možným způsobem, jak vyhodnotit kožní léze, jako je Chancre primárního syfilis nebo condyloma sekundárního syfilis. Pokud je materiál makulopapulárního ohniska suchý, zkontrolujte aspiraci lymfatických uzlin.

Negativní výsledek nevylučuje patologický proces, statisticky je identifikace patogenu možná pouze u 80%.

Diagnostika PCR

Reakce zaměřená na vícenásobné zvýšení DNA bledého treponému nám umožňuje dojít k závěru, že syfilitní infekce nebo její absence.

Biomateriál pro analýzu může být libovolný: krev, obsah syfilidu, mozkomíšního moku atd. Test je vhodný pro inkubační období..

PCR je zcela specifická.

Nepřímé sérologické testy na syfilis: treponemální a nontreponemální testy

Sérologické testy (DAC nebo komplex sérologických reakcí) jsou považovány za nejběžnější způsob diagnostiky všech stádií syfilis. Rozlišují se následující reakce:

• aglutinace;
• srážky;
• imunofluorescence;
• enzymový imunotest.

Sérologické testy na syfilis se také dělí na treponemální a nontreponemální.

Nontreponemální

Pokud existuje podezření na získaný syfilis, provádějí se screeningové testy, pro které se používají nerereponemální testy, které určují protilátky k lipoidním antigenům hostitelské nebo patogenní tkáně v různých modifikacích. V Ruské federaci je rutinně prováděna mikroprecipitační reakce (RMP), která umožňuje detekci protilátek proti krevním buňkám poškozeným patogenem. Spolehlivost screeningu je vysoká, ale specificita je malá, takže testování je vhodné pro počáteční hromadný screening pro preventivní účely.

Citlivost rychlých testů se odhaduje na 78-86% pro detekci primárního syfilis, 100% pro sekundární syfilis a 95-98% pro detekci terciárního syfilisu.

Specifičnost - od 85-99%, někdy méně, která se vyskytuje v následujících podmínkách:

• těhotenství;
• menstruace;
• onkologie;
• onemocnění pojivové tkáně;
• tuberkulóza;
• malárie;
• virová onemocnění;
• nemoc jater
• očkování;
• "Fresh" IM;
• tyfus atd..

Kromě toho může nadbytek tuku ve stravě, pití alkoholu a užívání některých léků vést k falešně pozitivním závěrům..

Výsledky skríningového testu se stanou pozitivní 1-2 týdny po vytvoření chancre. Nontreponemální testy dávají negativní odpověď nějakou dobu po léčbě. Se stavem HIV mohou být net Treponemální protilátky detekovány po dlouhou dobu, někdy po celý život (což potvrzují výsledky příslušné randomizované studie).

Další odrůdy nontreponemálních testů: VDRL, plasmaginový test (RPR), test s toluidinovou červení, reakce vázající komplement s kardiolipinovým antigenem (RSCC).

Wassermanova reakce (RW)

Vazba komplementu je reakce imunitního systému na infekci, výsledek se liší od negativního (kladný „-“) po výrazně pozitivní „++++“ nebo 4 plusy.

V počáteční fázi primárního syfilis je RW negativní.

Treponemal

Kvůli možnosti falešně pozitivních výsledků se treponemální testy používají k potvrzení jakéhokoli pozitivního nebo pochybného výsledku nontreponemální analýzy:

• imunofluorescenční reakce (RIF);
• hemaglutinace (RPHA),
• enzymový imunotest (ELISA) pro imunoglobuliny třídy G (IgG) a imunoglobulin M (IgM);
• imunoblotování;
• RIBT / RIT (imobilizační reakce bledých treponem).

Treponemální testy se nepoužívají k hodnocení účinnosti terapie.

RIF pro stanovení treponemálních protilátek třídy IgG se používá po pozitivním výsledku rychlých analýz (senzitivita 84% pro primární syfilis a 100% v jiných stádiích, specificita 96%). Pro diagnostiku vrozeného syfilisu u novorozenců nelze použít.

Některé laboratoře používají reverzní screeningové testy..

CDC (Centra pro kontrolu a prevenci nemocí, USA) doporučuje tradiční studie, ověřené kvantitativním nel Treponemálním testem, s pozitivním výsledkem, léčba je prováděna.

Imunofluorescenční reakce (RIF)

Sérum s fluorochromem značenými protilátkami specifickými pro bledý treponemový antigen je aplikováno na shromážděný materiál, patogen přitahuje imunitní komplexy k sobě, a proto začíná zářit luminiscenčním mikroskopem.

Pasivní hemaglutinační reakce nebo RPHA

Před výskytem hemaglutinace (lepení) červených krvinek od okamžiku zavedení bledého treponému musí uplynout nejméně 4 týdny..

Připravené červené krvinky s fixovanými proteinovými frakcemi patogenu interagují s plazmou, pokud existují protilátky proti syfilisu, dochází k reakci.

Vhodné pro potvrzení jakéhokoli stádia onemocnění..

Propojený imunosorbentový test

Základem je reakce antigen-protilátka. Jsou identifikovány protilátky různých tříd, které lze kvantifikovat..

Získané výsledky nám umožňují posoudit dobu trvání patologického procesu, úspěšnost léčby, imunologický stav, aktivitu patogenů.

Immunoblotting - typ ELISA, se používá pro hloubkovou diagnostiku všech pochybných výsledků.

Citlivost a specificita se blíží 100%, dnes je to ultracitlivá metoda pro identifikaci proteinů.

Metoda je založena na reakci antigen-protilátka. Bledý treponém kultivovaný v králíkových varlatech slouží jako antigen. Při interakci s protilátkami nakažené osoby ztratí patogeny svoji mobilitu. Reakce je hodnocena pomocí mikroskopie v tmavém poli..

RIBT jsou v současné době používány méně často kvůli složitosti, ale analýza může být užitečná k vyřešení sporných otázek (falešně pozitivní reakce na syfilis).

Diferenciální diagnostika

Největší potíž je diagnostika terciálního syfilisu, která je způsobena symptomy kardiovaskulárního a nervového systému a projevy z kůže.

Uvádíme choroby, s nimiž se provádí diferenciální diagnostika syfilis:

Kde začíná diagnóza syfilis

Zpočátku se vede rozhovor s pacientem, během kterého jsou podrobnosti vyjasněny: kdy došlo k podezřelému pohlavnímu styku a jaké jsou stížnosti.

Po sběru anamnézy prochází fyzickým vyšetřením, zvláštní pozornost je věnována oblasti genitálu a konečníku, sliznicím a lymfatickým uzlinám. Již je možné provést předběžnou diagnózu. Konečné ověření se provádí laboratorními testy..

Pokud řekneme jen něco komplikovaného, ​​některé testy odhalí původce syfilis, zatímco jiné odrážejí reakci těla na zavedení bledého treponému..

Chcete-li stanovit definitivní diagnózu RPHA, doplňte 1 treponemální a 1 non-treponemální analýzu.

Diagnóza syfilisu u těhotných žen

V těhotenství se několikrát provádí povinný test na syfilis..

Žádost o analýzu CSF je vydána během první návštěvy ženy při konzultaci a během těhotenství je vyšetřena třikrát. Pacienti z vysoce rizikové skupiny se zatíženou historií: STI, asociální, závislí atd. Vyžadují zvláštní pozornost.

Pokud jsou výsledky analýzy pozitivní, proveďte hlubší diagnostiku a podle indikací je předepsána léčba, která závisí na stadiu a klinických projevech.

Diagnóza vrozené syfilidy

Většina dětí s vrozeným syfilisem se rodí neléčeným matkám nebo těm, kteří byli léčeni příliš pozdě..

Neonatální sérové ​​treponemální testy se nedoporučují kvůli pasivnímu přenosu protilátek IgG. Všechny děti narozené matkám se syfilisem by měly být vyšetřeny pomocí kvantitativního netreponemálního sérologického testu (RPR nebo VDRL) provedeného s použitím krevního séra novorozence..

Jak interpretovat výsledky sérologických studií

Reakce mikrosrážení, RIF a RPHA jsou negativní - normální, pozitivní - potvrzení syfilis.

Mikroprecipitační reakce je negativní, zbytek je pozitivní - anamnéza syfilis po specifické terapii nebo pozdní stádium.

Negativní RIF s pozitivními RPHA a mikroprecipitačními reakcemi - výsledek je pochybný, opakované komplexní posouzení.

Negativní výsledek RIF a mikrosrážení, ale pozitivní RPHA je stav po úspěšné antibiotické terapii nebo falešně pozitivní.

Pozitivní RIF s negativními RPHA a mikroprecipitačními reakcemi - rané stádium, léčba nebo nespolehlivý výsledek.

Pozitivní mikroprecipitační reakce, nepotvrzená RPHA ani RIF - nepřítomnost syfilis.

Instrumentální výzkum pro syfilis

Instrumentální diagnostika se provádí v závislosti na zapojení orgánů. Například je možné pozorovat granulomatózní poškození jater pomocí počítačové tomografie břišní dutiny.

Rentgen hrudníku u pacientů s terciárním syfilisem může vykazovat dilataci aorty. Lineární kalcifikace podél aorty naznačuje syfilitickou aortitidu.

Angiografie může být užitečná při diagnostice abdominální syfilitické aneurysmy..

Při diagnostice neurosyphilis s odpovídajícími příznaky se používá bederní punkce s příjmem mozkomíšního moku..

Misha Victoria, urolog, lékařský pozorovatel

19 422 zobrazení celkem, dnes 8 zhlédnutí

Krevní test DAC, co to je

Treponemální testy na syfilis. obecný popis.

Obecné vlastnosti treponemálních testů

Treponemální testy na syfilis. Druhy sérologických reakcí.

RSCT - komplementová vazebná reakce s treponemálním antigenem (Wassermanova reakce)

1. Obecný popis

2. Princip zkoušky

3. Formulace Wassermannovy reakce s treponemálním a kardiolipinovým antigenem

4. Analýza ziskovosti

5. Specifičnost a citlivost

6. V jakých stádiích nemoci je lepší použít

7. Falešně pozitivní a falešně negativní výsledky

8. Modifikace Wassermannovy reakce

9. Rozsah

Komplex klasických sérologických reakcí (DAC)

Výhody DAC:

Nevýhody DAC:

1. Historie metody RIBT

2. Princip metody RIBT

3. Nastavení testu RIBT

4. Zaznamenávání výsledků RIBT

5. V jakých obdobích onemocnění je lepší použít

8. Zdroje a příčiny chyb ve formulaci, falešně pozitivní a falešně negativní výsledky

9. Modifikace reakce imobilizace světlých treponémů

10. Vlastnosti, výhody a nevýhody RIBT

RIF (imunofluorescenční reakce)

1. Historie metody

2. Princip metody

4. Analýza ziskovosti

5. V jakých obdobích onemocnění je lepší použít

7. Rozsah metody

8. Zdroje a příčiny chyb ve formulaci, falešně pozitivní a falešně negativní výsledky

9. Vlastnosti, výhody a nevýhody

10. Změny metody

RPHA reakce pasivní hemaglutinace

1. Historie metody RPGA

2. Princip metody RPGA

4. S ohledem na výsledky pasivní hemaglutinační reakce

5. V jakých obdobích onemocnění je lepší používat RPHA

6. Citlivost a specificita RPHA

7. Rozsah metody RPGA

8. Vlastnosti, výhody a nevýhody RPGA

10. Modifikace metody RPGA

IFA - Enzymaticky vázaný imunosorbentový test

1. Historie ELISA

2. Zásada ELISA

3. Způsob provádění výzkumu

4. Analýza ziskovosti

5. V jakých obdobích onemocnění je lepší použít

6. Citlivost a specificita

7. Rozsah metody

8. Zdroje a příčiny chyb ve formulaci, falešně pozitivní a falešně negativní výsledky

9. Vlastnosti, výhody a nevýhody

10. Změny metody

IHA (imunochemiluminiscenční analýza), IHL (imunochemiluminiscence)

Imunoblotting (Western Blot)

1. Historie metody

2. Klasický imunoblot

3. Imunoblot v lineárním imunotestu

4. Analýza ziskovosti

5. V jakých obdobích onemocnění je lepší použít

6. Citlivost a specificita

7. Rozsah metody

8. Zdroje a příčiny chyb ve formulaci, falešně pozitivní a falešně negativní výsledky

9. Vlastnosti, výhody a nevýhody

10. Změny metody

xMAP technologie

Diagnóza syfilis je založena na klinických a laboratorních datech. Mezi nimi jsou mimořádně cenné sérologické studie, které se provádějí nejen pro potvrzení diagnózy syfilis, ale také pro sledování jeho dynamiky pod vlivem probíhající terapie.

Sérologie syfilis je dnes samostatnou oblastí poznání. Byly vytvořeny různé reakce, které získaly státní uznání v různých zemích. Je důležité, aby výsledky byly správně interpretovány, čehož lze dosáhnout pouze se znalostí základů sérologie.

V naší zemi platí pro sérologickou diagnózu syfilis v souladu s pokyny ministerstva zdravotnictví:

- precipitační mikroreakce (MR) s kardiolipinovým antigenem - screeningový test během vyšetření populace na syfilis;

- Reagenční plazmatický test (RPR) se používá také jako screeningový test, i když není treponemální;

- komplex sérologických reakcí (DAC), který zahrnuje reakci vázající komplement (DSC) s treponemálními a kardiolipinovými antigeny a MR;

- reakce imobilizace světlých treponémů (RIBT), při nichž se jako antigen používají patogenní světelné treponémy kmene Nichols;

- imunofluorescenční reakce (RIF) (v modifikacích: RIF-abs, RIF-c a RIF s kapilární krví z prstu); patogenní světlý treponém kmene Nichols se používá jako antigen v RIF;

- reakce pasivní hemaglutinace (RPHA) s antigenem z kultivovaných nebo patogenních světlých treponemů;

Enzymově vázaný imunosorbentový test (ELISA) s antigenem z kultivovaného nebo patogenního světlého treponému.

Všechny tyto reakce mají různou citlivost a specifičnost a jsou doporučeny k použití v závislosti na úkolu.

Při hromadném profylaktickém vyšetření populace na syfilis se používá MR s krevní plazmou nebo inaktivovaným krevním sérem subjektů. Vyhodnocují se výsledky reakce.-

kvalitativně jako 4+, 3+, 2+ a negativní. Výhodou expresní metody je rychlost odezvy (po 30-40 minutách), malé množství krve nezbytné pro analýzu (2-3 kapky), které lze odebrat pacientům z prstu.

Pomocí této expresní metody jsou vyšetřováni lidé, kteří jsou podrobeni pravidelným lékařským prohlídkám na pohlavně přenosná onemocnění, pacienti se somatickými nemocnicemi a osoby umístěné ve zvláštních zařízeních pro zajištění. Pokud se expresní metoda používá izolovaně, jedná se pouze o screeningový test. Na základě jeho pozitivního výsledku není syfilis diagnostikován a subjekty jsou postoupeny dermatovenerologovi k dalšímu klinickému vyšetření a vyšetření své krve pomocí některého z dalších diagnostických testů (CSF, RIBT, RPGA, ELISA nebo RIF). Expresní metoda se nepoužívá u těhotných žen, dárců, protože často dává falešně pozitivní výsledky. Specializovaní záchranáři odebírají krev z prstu a provádějí MR. Laboratorní lékaři musí vzít v úvahu jeho výsledky.

CSC s treponemálními a kardiolipinovými antigeny se používají k potvrzení diagnózy syfilis v přítomnosti aktivních projevů nemoci, k vyšetřování lidí, kteří měli sex s pacientem se syfilisem, k identifikaci latentních (latentních) syfilis, účinnosti léčby, při vyšetřování pacientů v psychiatrických a neurologických nemocnicích, dárcích a těhotné ženy, včetně těch, které byly odeslány k umělé ukončení těhotenství.

Krev pro vyšetření se odebere v množství 5-7 ml z ulnární žíly sterilní jehlou, podléhá aseptickým pravidlům. U kojenců může být krev získána z časové žíly nebo z řezů na patě. Krev je přísně odebírána na lačný žaludek (5-6 hodin po jídle) a ponechána v čisté, suché zkumavce po dobu 2-3 hodin při pokojové teplotě pro srážení. DAC a specifické reakce se provádějí v sérologických laboratořích kožních a venereologických institucí a ve venkovských oblastech - v laboratořích venkovských okresních nemocnic.

Pro zasílání krve k výzkumu do vzdálených laboratoří je metoda suchých kapek velmi výhodná. Z tohoto důvodu se následující den po odběru krve sérum oddělí od sraženiny. Odměrná pipeta natáhne 1 ml séra a nalije ho ve formě dvou samostatných kruhů na proužek tlustého papíru (voskovaný nebo celofán) o rozměrech přibližně 6 × 8 cm. Jméno, jméno a patronymikum pacienta, datum odběru krve a sériové číslo jsou uvedeny na volném okraji papíru. Sérum na papíře, chráněné před přímým slunečním zářením a prachem, je ponecháno

po dobu 24 hodin při pokojové teplotě pro sušení. Poté se stočí proužky papíru se sušenou syrovátkou a odešlou do laboratoře.

RSK v DAC s kardiolipinovým antigenem není příliš citlivý a stává se pozitivním po 2-4 týdnech po výskytu tuhého chancre a titr reakčních látek se postupně zvyšuje a dosahuje maxima (1: 160-1: 320 a vyšší) se sekundárním čerstvým syfilisem. Potom titr reaginů postupně klesá a u sekundárních recidivujících syfilis obvykle nepřesahuje 1: 80-1: 20. U pacientů s terciárním syfilisem mají tyto reakce pozitivní výsledek pouze v 70% případů.

Je třeba zdůraznit, že DAC není striktně specifický pro syfilis a v některých případech může poskytnout falešně pozitivní (nespecifické) výsledky. Takové falešně pozitivní reakce jsou pozorovány u pacientů s leprou, malárií, někdy s autoimunitním onemocněním, novotvarů, pneumonie, tuberkulózy, onemocnění jater, při užívání léků (sulfonamidy, glukosidy, valeriány atd.), Jakož i během těhotenství, během menstruace atd. d. Při odběru krve pro výzkum DAC je nutné pacienta upozornit, aby nepil alkohol, mastná jídla ani neužíval léky 2-3 dny předem. Nedoporučuje se testovat krev po dobu 1 týdne po očkování, poranění, chirurgických zákrokech, s horečkou, během prvních 2 týdnů po narození, u novorozenců v prvních 10 dnech života, protože fyzikálně-chemické změny krevního séra za těchto podmínek mohou být podobné těm, které byly pozorovány u pacientů se syfilisem.

Falešně pozitivní výsledky lze také získat kvůli technickým chybám (neúplná hemolýza, nesterilní odběr krve, nedostatečná kvalifikace laboratorních asistentů).

K odlišení falešně pozitivních výsledků DAC od skutečných, k diagnostice latentních a pozdních forem syfilis, v případě podezření na syfilitickou infekci, ke stanovení retrospektivní diagnózy onemocnění, se doporučuje použít specifické sérologické reakce (RIBT, RPGA, ELISA nebo RIF).

V případě specifických sérologických reakcí se z ulnární žíly na prázdný žaludek odebere také krev v množství 5-10 ml. Krev se nalije do suché zkumavky pro testování na RIF a do sterilní zkumavky pro testování na RIBT. Formulace specifických sérologických reakcí na syfilis se provádí ve specializovaných laboratořích kůže a venereologických institucí.

RIF je založen na nepřímé metodě pro stanovení fluorescenčních protilátek. Antigen v této reakci je suspenze usmrceného kulturního světlého treponemu upevněného na skleněných sklíčkach, na které se aplikují testovací a antidruhová fluorescenční séra. Výsledky RIF se stanoví pod luminiscenčním mikroskopem vyhodnocením záře treponemu v přípravku. S pozitivním výsledkem mají treponema žlutavě zelenou záři, jejíž stupeň je označen plusy od 1 do 4; s negativními výsledky Treponema nesvítí.

Další specifická reakce na syfilis - RIBT - je založena na fenoménu imobilizace bledých treponemů s krevními sérovými antigeny pacienta v přítomnosti komplementu. Jako antigen pro RIBT se používá suspenze živých bledých treponemů získaných z králíků infikovaných syfilisem. Počítání ztracených (imobilizovaných) treponémů se provádí pod mikroskopem. Výsledky reakce se hodnotí v procentech: od 0 do 20% - negativní, od 21 do 30% - pochybné, od 31 do 50% - mírně pozitivní, od 51 do 100% - pozitivní. RIBT se stává pozitivním na konci primárního období syfilisu a zůstává tak po celou dobu tohoto onemocnění a někdy i po úplném anti-syfilním ošetření. U terciárních syfilis, specifických lézí vnitřních orgánů, nervového systému, s vrozeným syfilisem, když je CSF často negativní, dává RIBT pozitivní výsledky v 98–100% případů. Diagnóza latentního syfilisu musí být nutně potvrzena pozitivní RIBT.

RIBT může také poskytnout falešně pozitivní výsledky, pokud testované sérum obsahuje treponemocidní látky (antibiotika - penicilin, tetracyklin), které způsobují nespecifickou (toxickou) imobilizaci světlých treponemů. Proto nemůžete testovat krev na tuto reakci dříve než 2 týdny po ukončení užívání antibiotik.

Sérologické studie lze použít ke stanovení porážky syfilis nervové soustavy a zkoumání mozkomíšního moku pacienta. Je také vyšetřována na přítomnost bílkovin, enzymových prvků, které indikují patologii a pomáhají diagnostikovat jednu nebo druhou formu neurosyphilis. Mozkomíšní tekutina se získává bederní punkcí. Provádí asepticky, nepředstavuje žádné nebezpečí a může být provedeno lékařem i ambulantně. Sérologické studie mozkomíšního moku jsou indikovány ve všech případech syfilisu.

Mikroskopické vyšetření

V případě primárního syfilisu se vyšetřuje bledý treponém odnímatelného pevného chancre nebo propíchnutí lymfatických uzlin. V případě sekundárního syfilisu je materiál odebírán z povrchu erodovaných papule na kůži, sliznicích, prasklinách atd. Před odebráním materiálu za účelem čištění různých kontaminantů musí být povrch ložisek (eroze, vředy, praskliny) důkladně otřen sterilním tamponem z bavlny a gázy, který je navlhčen izotonickým roztokem. chlorid sodný nebo předepište krémy se stejným roztokem.
hledaný povrch se suší suchým tamponem a platinovou smyčkou nebo špachtlí lehce dráždí periferní oblasti, zatímco prsty v gumové rukavici lehce stlačuje základnu prvku, dokud se neobjeví tkáňová tekutina (sérum), z níž se připravuje příprava na výzkum. Získání tkáňové tekutiny je důležité pro diagnózu syfilis, protože bledé treponémy jsou umístěny v lumenech lymfatických kapilár, v tkáňových mezerách kolem lymfatických a krevních cév.

Propíchnutí regionálních lymfatických uzlin

Kůže na lymfatických uzlinách je ošetřena 96% alkoholem a 3-5% alkoholovým roztokem jodu. Poté 1 a 2 prsty levé ruky fixují lymfatickou uzlinu. Pravou rukou vezmou sterilní stříkačku s několika kapkami izotonického roztoku chloridu sodného, ​​který se vstřikuje rovnoběžně s podélnou osou lymfatické uzliny. Jehla je tlačena v různých směrech k protilehlé stěně uzlu kapsle a obsah stříkačky je pomalu zasunut. Prsty levé ruky je lymfatická uzlina lehce masírována. Při pomalém odstraňování jehly se píst stříkačky současně vytáhne a nasává obsah lymfatické uzliny. Materiál je nanesen na sklíčko (s malým množstvím materiálu je přidána kapka isotonického roztoku chloridu sodného), pokryté krycím sklíčkem. Studie nativního léčiva se provádí v tmavém zorném poli pomocí světelného mikroskopu s kondenzátorem v tmavém poli (čočka 40, 7x, 10x nebo 15x). Bledé treponémy lze také nalézt v obarvených přípravcích. Když se obarví podle Romanovského-Giemsy, zbarví bledé treponémy růžově, podle Fontana a Morozova hnědého (černého), podle Burriho metody jsou nenatřené treponémy detekovány na tmavém pozadí.

Sérologická diagnóza

Důležité v diagnostice syfilis, hodnocení účinnosti léčby, stanovení kritéria léčby, identifikace latentních, rezistentních forem je dána standardním (klasickým) a specifickým sérologickým reakcím. Standardní nebo klasické sérologické reakce (DAC) zahrnují:

• Wassermannova reakce (RV),
• sedimentární reakce Kan a Sachs-Vitebsk (cytocholic),
• reakce skla (expresní metoda),

na konkrétní:

• bledá treponemální imobilizační reakce (RIBT),
• imunofluorescenční reakce (RIF).

Wassermannova reakce (RV)

- byl vyvinut A. Wassermanem (A. Wassermanem) společně s A. Neisserem (A. Neisserem) a C. Brookem (C. Bruckem) v roce 1906. Wassermannova reakce je založena na fenoménu vazby komplementu (Borde-Zhanguova reakce) a umožňuje stanovení anti-lipidových protilátek (reaginů). Podle moderních konceptů Wassermanova reakce určuje protilátky proti lipidům makroorganismu spíše než bledý treponém a reakce odhaluje autoimunitní proces, který je způsoben denaturací tkání makroorganismů s bledými treponemy s tvorbou lipoproteinového komplexu (konjugátu), ve kterém lipidy (hapteny) jsou determinantem.

RV se obvykle dodává se dvěma nebo třemi antigeny. Nejčastěji se používá kardiolipinový antigen (extrakt ze srdce býka obohacený o cholesterol a lecitin) a treponemální antigen (ultrazvukem ošetřená suspenze anatogenního kulturního světlého treponemu). Spolu se sérovými činidly krevního séra pacienta tvoří tyto antigeny imunitní komplex, který dokáže adsorbovat a vázat komplement. Pro vizuální stanovení vytvořeného komplexu (reagencie + antigen + komplement) se jako indikátor používá hemolytický systém (směs ovčích erytrocytů s hemolytickým sérem). Pokud je komplement vázán v 1. fázi reakce (reagencie + antigen + komplement), nedochází k hemolýze - červené krvinky se vysráží na snadno patrnou sraženinu (PB pozitivní). Pokud komplement není vázán ve fázi 1 kvůli nepřítomnosti činidel v testovaném séru, použije se hemolytický systém a dojde k hemolýze (RV je negativní). Závažnost hemolýzy ve formulaci RV se odhaduje podle plusů: úplná absence hemolýzy ++++ nebo 4+ (RV je silně pozitivní); stěží zahájená hemolýza +++ nebo 3+ (PB pozitivní); významná hemolýza ++ nebo 2+ (PB slabě pozitivní); nesrozumitelný obrázek hemolýzy ± (RV je pochybný); kompletní hemolýza - (Wassermannova reakce je negativní).

Kromě kvalitativního hodnocení PB existuje kvantitativní formulace s různými ředěním séra (1:10, 1:20, 1:80, 1: 160, 1: 320). Titr reaginů je stanoven maximálním ředěním, které stále dává ostře pozitivní (4+) výsledek. Kvantitativní formulace RV je důležitá při diagnostice některých klinických forem syfilitické infekce a také při sledování účinnosti léčby. V současné době je Wassermanova reakce dodávána se dvěma antigeny (kardiolipin a treponemální zvukový kmen Reuters). RV se zpravidla stává pozitivní 5–6 týdnů po infekci u 25–60% pacientů, po 7–8 týdnech - 75–96%, po 9–19 týdnech - 100%, i když v posledních letech někdy dříve nebo později. Zároveň se titr reakčních látek postupně zvyšuje a dosahuje maximální hodnoty (1: 160-1: 320 a vyšší) v případě výskytu generalizovaných vyrážek (syfilis sekundární čerstvý). Když jsou diagnostikovány RV pozitivity s primárním séropozitivním syfilisem.
U sekundární čerstvé a sekundární recidivy syfilis je RV pozitivní u 100% pacientů, ale u podvyživených pacientů se oslabenou imunitou lze pozorovat negativní výsledek. Následně titr reaginů postupně klesá a u sekundárního recidivujícího syfilis obvykle nepřesahuje 1: 80-1: 120.
U terciálního syfilisu je RV pozitivní u 65–70% pacientů a obvykle je pozorován nízký titr reakčních látek (1: 20–1: 40). U pozdních forem syfilis (syfilis vnitřních orgánů, nervový systém) je pozitivní RV pozorována v 50–80% případů. Titr reakčních látek je v rozmezí 1: 5 až 1: 320.
U latentního syfilisu je pozitivní RV pozorována u 100% pacientů. Titr reakčních činidel je od 1:80 do 1: 640 a u pozdního latentního syfilisu od 1:10 do 1:20. Rychlý pokles titru činidla (až do úplné negativity) během léčby naznačuje účinnost léčby.

Nevýhodou Wassermannovy reakce je nedostatečná citlivost (negativní v počáteční fázi primárního syfilis). Negativní je také u 1/3 pacientů, pokud byli v minulosti léčeni antibiotiky, u pacientů s terciárním aktivním syfilisem s lézemi kůže a sliznic, kostního aparátu, vnitřních orgánů, centrálního nervového systému, s pozdním vrozeným syfilisem.
Nedostatek specifičnosti - Wassermanova reakce může být pozitivní u jedinců, kteří dříve nebyli nemocní a nemají syfilis. Zejména falešně pozitivní (nespecifické) výsledky RV jsou pozorovány u pacientů, kteří trpí systémovým lupus erythematodes, lepry, malárie, maligních novotvarů, lézí jater, rozsáhlého infarktu myokardu a jiných nemocí a někdy u zcela zdravých lidí.
U některých žen před nebo po porodu, u drogově závislých, po anestézii a požití alkoholu je detekována krátkodobá falešně pozitivní Wassermanova reakce. Falešně pozitivní RV je zpravidla slabý, často s nízkým titrem reaginů (1: 5-1: 20), pozitivní (3+) nebo slabě pozitivní (2+). Při hromadných sérologických vyšetřeních je frekvence falešně pozitivních výsledků 0,1-0,15%. Chcete-li překonat nedostatek citlivosti, použijte nastavení v chladu (Collardova reakce) a současně s dalšími sérologickými reakcemi.

Sedimentární reakce Caen a Sachs-Vitebska

Wassermannova reakce se používá v kombinaci se dvěma sedimentárními reakcemi (Kahn a Sachs-Vitebsk), jejichž složení produkuje koncentrovanější antigeny. Expresní metoda (mikroreakce na skle) - odkazuje na lipidové reakce a je založena na srážkové reakci. Je umístěn se specifickým kardiolipinovým antigenem, z čehož 1 kapka je smíchána se 2-3 kapkami testovaného krevního séra v otvorech speciální skleněné desky.
Výhodou je rychlost odezvy (po 30-40 minutách). Výsledky se odhadují podle množství sraženiny a velikosti vloček. Závažnost je definována jako DAC - 4+, 3+, 2+ a negativní. Je třeba poznamenat, že falešně pozitivní výsledky jsou pozorovány častěji než u RV. Expresní metoda se zpravidla používá pro hromadné screeningy syfilis, pro screening v klinických diagnostických laboratořích, somatických odděleních a nemocnicích. Na základě výsledků expresní metody je diagnóza syfilis zakázána, je vyloučena pro použití u těhotných žen, dárců i pro sledování po léčbě.

Imobilizace světlého treponému (RIBT)

Imobilizační reakce bledého treponému (RIBT) - navrhl v roce 1949 R. Nelson (R. W. Nelson) a M. Meyer (M. Mayer). Jedná se o nejkonkrétnější diagnostický test na syfilis. Jeho použití však omezuje složitost a vysoká cena výroby. V krevním séru pacientů se provádí stanovení specifických protilátek (imobilizinů), které vedou k imobilitě bledých treponémů v přítomnosti komplementu. Antigen je živá patogenní bledá treponemie vylučovaná z králíků infikovaných syfilisem. S pomocí mikroskopu se provádí počítání ztracených (imobilizovaných) bledých treponemů a vyhodnocují se výsledky RIBT: imobilizace bledých treponemů z 51 na 100% je pozitivní; od 31 do 50% - mírně pozitivní; od 21 do 30% - pochybné; od 0 do 20% - negativní.
RIBT je v diferenciální diagnostice důležitý pro rozlišení falešně pozitivních sérologických reakcí od reakcí způsobených syfilisem. Pozdní se stává pozitivní než RV, RIF, a proto se nepoužívá pro diagnostiku infekčního syfilis, i když v sekundárním období syfilis je pozitivní u 85–100% pacientů.
V terciárním období syfilis se poškozením vnitřních orgánů, pohybového aparátu, nervového systému je RIBT v 98–100% případů pozitivní (PB je často negativní).
Je třeba si uvědomit, že RIBT může být falešně pozitivní, pokud jsou v séru přítomny treponemocidální přípravky (penicilin, tetracyklin, makrolidy atd.), Které způsobují nespecifickou imobilizaci světlých treponemů. Za tímto účelem je krev na RIBT testována nejdříve 2 týdny po ukončení užívání antibiotik a jiných léků.
RIBT i RIF během léčby jsou pomalu negovány, proto se během léčby nepoužívá jako kontrola.

Imunofluorescenční reakce (RIF)

Imunofluorescenční reakce (RIF) - vyvinutá v roce 1954 A.Coonsem a byla poprvé použita k diagnostice syfilitické infekce Deacon, Falcone, Harris v roce 1957. RIF je založen na nepřímé metodě pro stanovení fluorescenčních protilátek. Antigen pro produkci je tkáňově patogenní bledá treponemie fixovaná na skleněných sklíčkach, na které je naneseno testovací sérum. Pokud testované sérum obsahuje anti-treponemální protilátky související s IgM a IgG, pevně se vážou na treponemální antigen, který je detekován v luminiscenčním mikroskopu pomocí antidruhového („anti-lidského“) fluorescenčního séra.
Výsledky RIF se berou v úvahu podle intenzity záře bledých treponémů v přípravku (žluto-zelená záře). V nepřítomnosti sérových treponemálních protilátek nejsou detekovány bledé treponémy. V přítomnosti protilátek je detekována luminiscence světlých treponémů, jejichž stupeň je vyjádřen v pluscích: 0 a 1+ - negativní reakce; od 2+ do 4+ - pozitivní.
RIF označuje skupinové treponemální reakce a je umístěn do ředění testovaného séra 10 a 200krát (RIF-10 a RIF-200). RIF-10 je považován za citlivější, nespecifické pozitivní výsledky však často klesají než při nastavení RIF-200 (vyznačuje se vyšší specificitou). RIF se zpravidla stává pozitivní dříve než RV - pozitivní u primárních seronegativních syfilis u 80% pacientů, u 100% ve sekundárním období syfilis, vždy pozitivních u latentních syfilis a 95-100% případů s pozdními formami a vrozeným syfilisem.
Specifičnost RIF se zvyšuje po předběžném ošetření testovaného séra sorbent-ultrazvukovým treponemálním antigenem, který váže skupinové protilátky (RIF - abs).
Indikací pro formulaci RIBT a RIF je diagnóza latentního syfilis k potvrzení specifičnosti komplexu lipidových reakcí v případě syfilitické infekce založené na pozitivní RV. Pozitivní RIBT a RIF jsou důkazem latentního syfilis. V případě falešně pozitivních RV u různých onemocnění (systémový lupus erythematodes, maligní novotvary atd.) A pokud jsou opakované výsledky RIBT a RIF negativní, znamená to nespecifickou povahu RV. Podezření pozdních syfilitických lézí vnitřních orgánů, muskuloskeletálního systému, nervového systému v přítomnosti negativního RV u pacientů. Podezření na primární seronegativní syfilis, když u pacientů s vícečetnými studiemi eroze (vředů) oddělených od povrchu, s bodkováním ze zvětšených regionálních lymfatických uzlin, není detekován bledý treponém - v tomto případě je umístěn pouze RIF - 10.
Při vyšetřování osob s negativním RV, které prodlužovaly sexuální a domácí kontakt s pacienty se syfilisem, byla vzhledem k pravděpodobné možnosti jejich léčby v nedávné minulosti anti-syfilitickými léky způsobujícími negativní RV. Enzymově vázaný imunosorbentový test (ELISA, ELISA - enzymatický imunosorbentový test) - metoda vyvinutá E. Engvallem a kol., S. Avrames (1971). Podstata spočívá v kombinaci syfilitického antigenu adsorbovaného na povrchu nosiče v pevné fázi s protilátkou testovaného krevního séra a identifikace specifického komplexu antigen-protilátka s použitím enzymem značeného antispeciálního imunitního séra. To umožňuje vizuálně vyhodnotit výsledky testu ELISA podle stupně změny barvy substrátu působením enzymu, který je součástí konjugátu. Nespolehlivé výsledky testu ELISA se mohou objevit v důsledku nedostatečného ředění přísad, porušení teplotních a časových podmínek, neshodnosti v pH roztoků, kontaminace laboratorního skla, nesprávného promývání médií.

Pasivní hemaglutinační reakce (RPHA)

Navržen jako diagnostický test na syphilis T. Ratath (1965.1967), T. Tomizawa (1966). Makromodifikace reakce se nazývá TRNA, mikromodifikace se nazývá MNA-TP, automatizovaná verze je AMNA-TR, reakce s makrokapslemi z polymočoviny místo červených krvinek je MCA-TP. Citlivost a specificita RPHA jsou podobné jako u RIBT, RIF, ale RPGA je méně citlivý u časných forem syfilis ve srovnání s RIF-abs a vyšší u pozdějších s vrozeným syfilisem. RPGA je kladen na kvalitativní a kvantitativní možnosti.

Technika odběru krve pro sérologické reakce

Pro výzkum RV, RIF se krev RIBT odebírá z ulnární žíly na lačný žaludek nebo nejdříve 4 hodiny po požití sterilní stříkačkou nebo jednou jehlou (gravitací). V okamžiku zachycení je kůže předem ošetřena 70% alkoholem. Injekční stříkačka a jehla by měla být propláchnuta izotonickým roztokem chloridu sodného. Do čisté suché zkumavky se nalije 5-7 ml testované krve. Na zkumavku se nalepí prázdný papír se jménem, ​​iniciálami pacienta, číslem lékařské anamnézy nebo ambulantní karty a datem odběru krve. Po odběru krve se zkumavka vloží do chladničky s teplotou + 4 ° + 8 ° C až do následujícího dne. Následující den je sérum vypuštěno pro výzkum. Pokud se krev nepoužije následující den, musí být sérum vypuštěno ze sraženiny a skladováno v chladničce po dobu nejvýše 1 týdne. Pro testování na RIBT musí být zkumavka speciálně připravena a sterilní. V případě porušení pravidel pro odběr krve pro výzkum, nedodržení podmínek, zkreslení výsledků.
Nedoporučuje se odebírat vzorky krve pro výzkum po jídle, alkoholu, různých lécích, po zavedení různých vakcín, během menstruačního cyklu u žen..
Pro výzkum expresní metody je krev ošetřována z prstu, jako je tomu při přijímání na ESR, ale kapiláru 1 odebírají. Expresní metodu lze také stanovit pomocí krevního séra získaného venipunkcí. Pokud potřebujete krevní testy ve vzdálených laboratořích, místo krve, můžete poslat suché sérum (metoda suchých kapek). Následující den po odběru krve se sérum oddělí od sraženiny a odebere se do sterilní stříkačky v množství 1 ml. Poté se sérum nalije ve formě dvou samostatných kruhů na proužek tlustého psacího papíru (voskový papír nebo celofán) o rozměrech 6 × 8 cm. Na volný okraj papíru se uvede jméno, iniciály subjektu a datum odběru krve. Sérový papír je chráněn před přímým slunečním zářením a ponechán při pokojové teplotě až do následujícího dne. Sérum schne ve formě malých kruhů lesklé nažloutlé sklovité fólie. Poté se pásy papíru se sušenou syrovátkou stočí jako farmaceutický prášek a odešlou do laboratoře s uvedením diagnózy a za jakým účelem se zkoumá.

Sérologická rezistence

U některých (2% nebo více) pacientů se syfilisem je navzdory plnohodnotné anti-syfilitní terapii po léčbě po dobu až 12 měsíců nebo déle zpomalení (absence) negativních sérologických reakcí. Existuje tzv. Sérologický odpor, který se v posledních letech často pozoroval. Existují formy sérologické rezistence:

• Pravda (absolutní, bezpodmínečná) - pro zvýšení imunitních sil v těle je nutné provést další antisyphilitickou léčbu kombinovanou s nespecifickou terapií.
• Relativní - bledé treponémy tvoří po řádném ošetření cysty nebo L-formy, které jsou v těle v nízko virulentním stavu a v důsledku toho další léčba nemění ukazatele sérologických reakcí, zejména RIF a RIBT..

Současně dochází k nevýznamným metabolickým procesům v cystových formách a cystové skořápky jsou cizím proteinem (antigenem). Pro jeho ochranu tělo produkuje specifické protilátky, které jsou pozitivní nebo ostře pozitivní při formulaci sérologických reakcí, absence projevů nemoci. U L-forem jsou metabolické procesy více redukovány a antigenní vlastnosti chybí nebo se mírně exprimují. Specifické protilátky nejsou produkovány nebo jsou v malém množství, sérologické reakce jsou slabě pozitivní nebo negativní. Čím delší je časové období od okamžiku infekce, tím větší počet bledých treponemů se transformuje na formy přežití (cysty, spory, L-formy, zrna), ve kterých není antosfilitická terapie účinná.

Pseudorezistence - po léčbě, i přes pozitivní sérologickou reakci, v těle chybí bledý treponém. V těle není žádný antigen, ale produkce protilátek pokračuje, které jsou fixovány během produkce sérologických reakcí.
Sérologická rezistence se může vyvinout v důsledku:

• horší léčba, aniž by se bralo v úvahu předpis a stádium choroby;
• nedostatečná dávka a zejména kvůli nezohlednění tělesné hmotnosti pacienta;
• porušení intervalu mezi zavedením drog;
• konzervace světlých treponemů v těle navzdory plnohodnotnému specifickému ošetření díky jejich rezistenci na penicilin a jiná chemoterapeutická léčiva v přítomnosti skrytých, hmatných lézí ve vnitřních orgánech, nervovém systému, lymfatických uzlinách, které jsou pro antibakteriální léčiva nepřístupné (často se vyskytují bledé treponémy) v tkáních jizvy mnoho let po ukončení terapie je někdy možné detekovat bledé treponémy v lymfatických uzlinách 3 až 5 let po antisyphilitické terapii);
• snížení ochranných sil u různých nemocí a intoxikací (endokrinopatie, alkoholismus, drogová závislost atd.);
• celkové vyčerpání (stravování chudých na vitamíny, bílkoviny, tuky).

Kromě toho je často detekována falešně pozitivní sérologická reakce, která není spojena s přítomností syfilis u pacientů a je způsobena:

• doprovodná nespecifická onemocnění vnitřních orgánů, poruchy kardiovaskulárního systému, revmatismus, dysfunkce endokrinního a nervového systému, těžké chronické dermatózy, maligní nádory;
• léze nervového systému (těžká zranění, otřes mozku, duševní zranění);
• těhotenství chronická intoxikace alkoholem, nikotinovými drogami; infekční onemocnění (malárie, tuberkulóza, virová hepatitida, úplavice, vyrážka, tyfus a recidivující horečka).

Tyto faktory mohou ovlivnit imunologickou reaktivitu organismu jak v období aktivního vývoje syfilitických projevů, tak během jejich regrese..